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納氏比色定氮法簡介
儀器設(shè)備:
1.容量瓶:50 mL 9個(gè),1000mL 2個(gè),100mL 1個(gè);
2.燒杯;
3.刻度吸管:1mL 1支,2mL 2支,10 mL 1支;
4.分光光度計(jì)。
消煮需用的儀器設(shè)備同凱氏定氮儀法。
試驗(yàn)所需試劑:
1.濃硫酸(AR級);
2.30%過氧化氫;
3.10%酒石酸鈉。
4.10%KOH。
5.納氏試劑;
6.100 ug·mL-1 N(NH4-N)標(biāo)準(zhǔn)溶液。
方法步驟:
1.蛋白氮的分離提取同凱氏定氮法。
2.樣品的消化:準(zhǔn)確稱取混勻磨細(xì)的植物干樣品0.1~0.3g,置于消煮管中,加濃硫酸5mL,輕輕搖勻(靜置過夜或在110℃烘箱中放置l~2h),蓋上彎頸小漏斗,在紅外消煮爐上先低溫(約200℃左右)消煮(開始會(huì)有大量白色煙霧逸出),待白色煙霧消失后,取下消煮管,稍冷卻,逐滴加入30%的H 202約o.5mL,并要不斷輕搖消煮管,繼續(xù)加熱微沸5min左右,再取下稍放冷,重復(fù)加幾滴雙氧水,再消煮,如此反復(fù)數(shù)次(約2~3次),每次添加的雙氧水應(yīng)逐次減少,消煮至溶液呈無色或清亮后,再繼續(xù)消煮5~15min,以除盡剩余余的雙氧水。取下,冷卻,用少量水沖洗彎頸漏斗,洗液流入消煮管。將消煮液*無損地轉(zhuǎn)移至100 mL容量瓶中,蒸餾水定容。用定量濾紙過濾到三角瓶中,或放置澄情后測氮。記住消煮時(shí)做空白實(shí)驗(yàn)。
3.樣品消化液的測定;吸取稀釋消煮液及空白試驗(yàn)液l~5mL,置于50 mL容量瓶中,加入2mL 10%的酒石酸鈉溶液,充分搖勻,再加10%KOH溶液中和之(另取相當(dāng)量消煮液做空白實(shí)驗(yàn),用*作指示劑,試驗(yàn)中和時(shí)需KOH溶液毫升數(shù)),加水稀釋至約40 mL,搖勻,加2.5mL納氏試劑,加水至刻度,充分搖勻。30 min后,用420 nm波長進(jìn)行比色,記錄吸光度(含濾紙的樣品其吸光度應(yīng)減去濾紙消化液吸光度)。
4.標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線或求回歸方程。
5.結(jié)果結(jié)算。
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